图1.流程图培养免疫磁珠分离的单核细胞1 x /mL,在添加了™DC细胞分化添加物(货号#10988)的™-ACF DC培养基(货号#10987)中进行分化,形成成熟的DC细胞。第3天sem细胞培养条件,更换培养基,并继续孵育2天。第5天,不更换培养基,再原来的培养基中加入™DC成熟添加物(货号#10989)。第7天,收获完全成熟的树突状细胞供下游应用。
图2.用含添加物的™-ACF树突状细胞培养基产生的成熟DC具有期望的表型如图1所述,将™分离的单核细胞培养并分化为成熟的DC。(A)通过流式细胞术测定第7天(成熟DC)的细胞中CD14和CD83表达的百分比。第7天,93±5%的细胞表达成熟DC标记CD83,仅1±1%的细胞仍表达单核细胞标记CD14(平均值±SD,n=39)。通过计数第7天的活细胞总量与第1天活得单核细胞总量的相对值确定成熟DC的产量。第7天,存活的成熟DC的产量一致为45±25%(平均值±SD,n=39)。(B)如图1所述培养未成熟DC。在第5天,细胞在含成熟添加物的培养基中培养2天(成熟DC)或不含成熟添加物物(未成熟DC)。在第7天收集上清液,通过ELISA测定IL-12p70水平。成熟和未成熟DC上清液中IL-12p70的浓度分别为361±81和5±2pg/mL(平均值±SEM,n=27)。
图3.用™-ACF DC细胞培养基和添加物产生的成熟DC细胞诱导T细胞增殖用™-ACF DC细胞培养基和添加物或其他无血清竞品培养基(竞品1和2)及相应的添加物(竞品2),产生的成熟DC,与1 x 标记的(A)同源CD3 T细胞(MLR法)或(B)同源CD8 T细胞(抗原特异性T细胞反应)一起在™-XF T细胞扩增培养基中培养。(A) DC:T细胞比例为1:25,(B)在T细胞培养前,将人巨细胞病毒()、EB病毒(-Barr)和流感病毒(CEF)的HLA-Ⅰ类多肽负载于不成熟的DC中,用成熟添加物刺激2天。按DC:T细胞比例1:4或1:10培养。(Asem细胞培养条件,B)CFSE标记的T细胞单独在培养基中培养(阴性对照)或用™ Human CD3/CD28 T细胞激活剂激活(阳性对照)。培养5-7天后,用流式细胞仪(平均±SEM)(A)n=5(B)n=4(竞品1和2,n=3)检测分化T细胞数(CD3+)。™-ACFDC培养基中诱导的成熟DC细胞与在任何竞品培养基中产生的DC类似,诱导同源的和抗原特异性T细胞的增殖。竞品1和2,不按特定顺序,包括 DC培养基()和 DC形成培养基DXF。
本文内容由互联网用户自发贡献,该文观点仅代表作者本人。本站仅提供信息存储空间服务,不拥有所有权,不承担相关法律责任。如发现本站有涉嫌抄袭侵权/违法违规的内容,请添加站长微信举报,一经查实,本站将立刻删除。
如若转载,请注明出处:http://www.ibjoo.com/20532.html